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孤腓肽ELISA试剂盒相关知识介绍

2018-06-21

  孤腓肽ELISA试剂盒运用双抗体夹心法测定标本中(产品名称)水平。用纯化的其抗体包被微孔板,制成固相抗体。往包被单抗的微孔中顺次参加本产品,再与HRP符号的其抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过完全洗刷后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终究的黄色。色彩的深浅和样品呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),经过规范曲线核算样品中产品的浓度。

  试剂盒组成:

  1、30倍浓缩洗刷液20ml×1瓶7停止液6ml×1瓶

  2、酶标试剂6ml×1瓶8规范品(240ng/L)0.5ml×1瓶

  3、酶标包被板12孔×8条9规范品稀释液1.5ml×1瓶

  4、样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份

  5、显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张

  6、显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个

  标本要求:

  1.标本收集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能立刻进行实验,可将标本放于-20℃保存,但应避免重复冻融

  2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3按捺辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

  操作过程:

  1.规范品的稀释:本试剂盒供给原倍规范品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

  120ng/L5号规范品150μl的原倍规范品参加150μl规范品稀释液

  60ng/L4号规范品150μl的5号规范品参加150μl规范品稀释液

  30ng/L3号规范品150μl的4号规范品参加150μl规范品稀释液

  15ng/L2号规范品150μl的3号规范品参加150μl规范品稀释液

  7.5ng/L1号规范品150μl的2号规范品参加150μl规范品稀释液

  2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、规范孔、待测样品孔。在酶标包被板上规范品精确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品终究稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

  操作程序总结:

  1.预备试剂,样品和规范品

  2.参加预备好的样品和规范品,37℃反响30分钟

  3.洗板5次,参加酶标试剂,37℃反响30分钟

  4.洗板5次,参加显色液A、B,37℃反响10分钟

  5.参加停止液

  6.15分钟之内度OD值

  7.核算

  注意事项:

  1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可运用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

  2.浓洗刷液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗刷时不影响成果。

  3.各步加样均应运用加样器,并常常校正其精确性,以避免实验误差。一次加样时刻**控制在5分钟内,如标本数量多,引荐运用排枪加样。

  4.请每次测定的一起做规范曲线,**做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于规范品孔榜首孔的OD值),请先用样品稀释液稀释必定倍数(n倍)后再测定,核算时请*终乘以总稀释倍数(×n×5)。


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