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检测elisa试剂盒的五大方法

2018-06-23

  elisa试剂盒是有着极端严厉的要求,不能呈现过失。所以人们对elisa试剂盒的检测必定要注意,没有人希望呈现问题。那elisa试剂盒检测有哪些方法?

  一、直接法

  将抗原直接固定在固相载体上,参与酶符号的一级抗体,即可测定抗原总量,此一级抗体的特异性非常重要。

  1. 优势:操作手续简略,因无须运用二抗可防止交互反应。

  2. 缺点:试验中的一抗都得用酶符号,但不是每种抗体都适合做符号,费用相对前进。

  二、间接法

  此测定方法与直接法类似,不相同在于一级抗体没有酶符号,改用酶符号的二级抗体去辨识一级抗体来测定抗原量。

  1. 优势:二抗可以加强信号,而且有多种挑选能做不相同的测定剖析。不加酶符号的一级抗体则能保存它zui多的免疫反应性。

  2. 缺点:交互反应发生的机率较高。

  三、双抗体夹心法

  被检测的抗原包被在两个抗体之间,其间一个抗体将抗原固定于固相载体上,即捕捉抗体。另一个则是检测抗体,此抗体可用酶符号后直接测定抗原的量;或不符号,再透过酶符的二级抗体来测定抗原的量。这两种抗体有必要留神挑选,才可防止交互反应或竞赛相同的抗原联络部位。

  1. 优势:高活络、高专一性,抗原无须事前纯化。

  2. 缺点:抗原必定得具有两个以上的抗体联络部位。

  四、竞赛法

  样本里的抗原(安闲抗原)和纯化并固定在固相载体上的抗原(固定抗原)一起竞赛相同的抗体,当样品里的安闲抗原越多,就可以联络越多的抗体,而固定抗原就只能联络到较少的抗体,反之亦然。经清洁进程,洗去安闲抗原和抗体的复合物,只留下固定抗原和抗体的复合物,拿来与只需固定抗原的对照组效果相比较,依据呈色差异就可计算出样品里的抗原含量。

  1. 优势:可适用比较不纯的样本,而且数据再现性很高。

  2. 缺点:整体的敏感性和专一性都较差。

  五、依据细胞法

  是一种新的定性蛋白检测技能,将细胞直接在微孔板里培育,待检测时,不需抽提蛋白和裂解细胞,便可直接测量微孔板里蛋白经影响或抑制作用后的改动。

  1. 优势:无需裂解细胞,所以政策蛋白丢掉少,可测定无缺细胞、黏附细胞、还有非粘附细胞。

  2. 缺点:不能测定抗原量。


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