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ELISA试剂盒检测方法的由来和原理

2018-06-29

  酶联免疫检测技能(elisa试剂盒检测办法)是20世纪60年代晚期发展起来的一种免疫学检测办法,是现在zui广泛使用的符号免疫技能。1966年Nakene和Pierce一起发表了《酶标抗体:制备和抗原定位中的使用》,首要提出了酶联免疫技能(ELISA试剂盒检测办法)的基本原理。1971年Engvall和Perlmann发表《ELISA KIT办法吸附实验测定IgG含量》一文,使酶联免疫(ELISA试剂盒检测)技能成为一种有用的检测液体标本中微量物质的办法。现在酶联免疫(ELISA试剂盒)检测技能已广泛用于免疫学、微生物学、寄生虫学等。因为其具有灵敏度高、试剂安稳、设备简略、操作安全等长处,近几年也将其使用到食物领域中来检测某些食物中的生理活性物质。

  一、基本概念

  1、免疫:抽象地归纳起来,免疫就是人和动物机体防御、扫除外来物质(异物)进人体内,一起识别和铲除体内逝世、变性物质和平定体内叛乱分子骤变细胞,以维护和安稳本身的防护机制。

  2、抗原:抗原是指那些可以诱导机体的免疫系统发作免疫应对,发作抗体和致敏效应淋巴细胞,并在体表里与之特异性结合,发作免疫反响的物质。

  3、抗体:是能与相应的抗原专一性结合的蛋白质分子,和机体其他生物大分子相同是细胞的产品,排泄到体液中或表现在细胞表面上。

  4、抗原、抗体反响:抗原和抗体在体外的反响亦称血清学反响。这类反响可凭借免疫学办法进行检测。

  二、抗体定量检测办法及其原理

  定量分析抗体的常用办法有分散法、酶联免疫吸附法和火箭免疫电泳法等。

  1、免疫分散法

  a、单向免疫分散法

  原理:将待检抗原滴加于含相应抗体的琼脂板小孔中,经必定时刻分散后。构成乳白色的沉积坏,在必定浓度范围内,抗原的含量与沉积坏直径成正比。可以先用己知不同浓度的规范抗原制成规范曲线,再依据测验样品沉积环直径的巨细,从规范曲线上查出样品中抗原的相应含量。

  b、双向免疫分散法

  原理:可溶性抗原与已知可溶性抗体分别参加相邻的琼脂糖凝胶板上的小孔内,在电解质存在下让它们相互向对方分散。当两者在zui恰当份额处相遇时,即构成一条明晰的沉积线。依据稀释度与已知规范品稀释度之比,可核算出抗体含量。

  2、火箭免疫电泳法

  原理:抗原在电场力的效果下向前移动,当抗原在通过含有必定量单一抗体的琼脂凝胶时,即构成抗原抗体复合物,份额适宜即沉积下来。因抗体迁移率低,而抗原随电泳向前移动,因而使抗原、抗体构成圆锥形的沉积峰。在必定浓度范围内,峰的高度与抗原的浓度呈正比。

  3、酶联免疫吸附法(ELISA)

  原理:ELISA可用于测定抗体,也可用于检测杭原。其基本原理是选用抗原与抗体的特异反响将待测物与酶衔接,然后通过酶与底物发作色彩反响,用于定量测定。测定的对象可所以抗体也可所以抗原。3种必要的试剂: ①固相的抗原或抗体(免疫吸附剂); ②酶符号的抗原或抗体(符号物); ③酶效果的底物(显色剂)。

  ELISA进程包括:抗原吸附在固相载体上,这个进程称为包被,加待测抗体, 再加相应酶符号抗体,生成抗原--待测抗体--酶符号抗体的复合物,再与该酶的底物反响生成有色产品。凭借分光光度计的光吸收核算抗体的量。

  依据检测目的和操作过程不同,有以下三种类型的常用办法:

  a、间接法

  此法是测定抗体zui常用的办法。将已知抗原吸附于固相载体。加人待检标本(含相应抗体)与之结合。洗刷后,加人酶标抗球蛋白抗体(酶标抗抗体)和底物进行测定。

  b、双抗体夹心法

  此法常用于测定抗原。将已知抗体吸附于固相载体,加人待检标本(含相应抗原)与之结合。温育后洗刷,加人酶标板中。

  c、竞争法

  此法可用于抗原和半抗原的定量测定,也可用于测定抗体。以测定抗原为例,将特异性抗体吸附于固相载体。参加待测抗原和必定量的酶标已知抗原,使二者竟争与固相抗体结合;通过洗刷别离,zui后结合于固相的酶标抗原与待测抗原含量呈负相关。


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