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常用提取DNA的方法有哪些

2018-09-26

  科技变得更加发达,人们的科研也越来越厉害。有很多研究室都在研究DNA,而且是从各种不同生物身上提取DNA。而不同生物的DNA情况不一样,所采用的提取的办法也不同。那么一般都有哪些提取DNA的办法?

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  一.浓盐法提取dna

  A. 使用RNA和DNA在电解溶液中溶解度不同,将二者别离,常用的办法是用1M 氯 纳提取化钠抽提,得到的DNP粘液与含有少数辛醇的 CCL4一同摇摆,使乳化,再离心除掉蛋白质,此刻蛋白质凝胶停留在水相及CCL4相中心,而DNA坐落上层水相中,用2倍体积95%乙醇可将DNA 钠盐沉积出来.

  B. 也可用0.15 MNaCL液重复洗刷细胞破碎液除掉RNP,再以1MNaCL提取脱氧核糖蛋白,再按CCL4---异醇法除掉蛋白.

  两种办法比较,后种办法使核酸降解可能少一些.

  C.以稀盐酸溶液提取DNA 时,参加适量去污剂,如SDS可有助于蛋白质与DNA 的别离。在提取过程中为按捺组织中的DNase对DNA 的降解效果,在氯化钠溶液中参加柠檬酸钠作为金属离子的烙合剂.通常用.15MNaCL,0.015M柠檬钠,并称SSC溶液,提取DNA.

  二.阴离子去污剂法提取dna:用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,可以直接从生物资料中提取DNA .因为细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合,因为阴离子去污剂能够损坏这种价键,所以常用阴离子去污剂提取DNA

  三.苯酚抽提法提取dna:苯酚作为蛋白变性剂,一起按捺了DNase的降解效果.用苯酚处理匀浆液时,因为蛋白与DNA 联合键已断,蛋白分子表面又含有许多极性基团与苯酚类似相溶。蛋白分子溶于酚相,而DNA溶于水相。离心分层后取出水层,屡次重复操作,再兼并含DNA 的水相,使用核酸不溶于醇的性质,用乙醇沉积DNA 。此刻DNA是非常粘稠的物质,可用玻璃漫漫绕成一团,取出。此法的特点是使提取的DNA坚持天然状况

  四.水抽提法提取dna:使用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除掉RNA,然后将沉积溶于水中,使DNA充分溶解于水中,离心后搜集上清液.在上清中参加固体氯化钠调理至2.6M.参加2倍体积95%乙醇,立即用拌和法搅出.然后分别用66% ,80%和95%乙醇以及丙铜洗刷,zui后在空气中干燥,既得DNA样品.此法提取的DNA中蛋白质含量较高,故一般不必.为除蛋白可将此法加以改进,在提取过程中参加SDS.


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