皮质醇ELISA试剂盒是可以根据实验工作量以及难易程度，再采用不同的标本和操作方法的，对该试剂盒加入终止液的，得避免起泡，导致液体造成假阳性的，终止液加入后就轻轻的放下。使终止液与板孔内溶液充分混匀；酶标板读数前，应轻轻拭去板底的水迹和污物，保证板底干洁，以免影响读数；应根据底物液选择合适的读数波长，如TMB一般选择450nm波长，PNPP一般选择405nm波长等；加入终止液后，应尽快读板，酶标板内颜色会随着终止时间的延长而变淡。

    该试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验，预先被皮质醇捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的皮质醇呈正相关。需要用酶标仪在450nm波长下测定吸光度，计算样品浓度。

    应严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。预处理后的样本无需稀释，直接取10μL加样即可。皮质醇ELISA试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。