1、取出试剂盒，放置于室温20度25度)30分钟。

　　2、分组：取出96口井板，根据待测样品数和标准产品数确定所需条带，继续对剩余板条进行冷藏，并分别建立标准产品组(6个浓度)、空白孔和待测样品组。

　　注：为减小实验误差，保证精度，建议设置复合孔。

　　3、样品添加：按标准产品的顺序，在空白微孔中加入100μl标准溶液，在空白对照孔中加入100μl蒸馏水，在其它微孔中加入100μl标准溶液。

　　4、酶标准溶液：在标准产品组和待测样品组(空白对照孔除外)的每个孔中加入50μl酶标准溶液。

　　5、培养：酶标板用密封纸密封后，用37℃在湿箱中孵育1小时。

　　6、洗衣板：将稀释后的洗涤剂灌满每个孔，设定15次30秒30，将酶标板洗5次，用吸水纸彻底冲洗干。

　　7、显色：在每个孔加入显色剂A液50μl后，再加入显色剂B液50μl。

　　8、终止：在25℃-37℃时，避光反应为10 min 15 min，加入50μl终止液。

　　9、读写板：在波长450 nm处读出每个孔的O值。

　　注：在读取极板时，应将盘子底部残留的液体和指印烘干，并应在反应结束后30分钟内控制读数时间，以免影响准确度。