1xTBST洗涤液

1×TBST 洗涤液

TBST 就是在 1×TBS 基础上添加吐温 20，是 Western blot 最常用的膜洗涤液，用于洗去未结合的一抗、二抗，降低背景。

配制方式有两种，＊＊种利用 10×TBS 储备液稀释，量取 100 毫升 10×TBS 母液，加入 900 毫升超纯水混匀，得到 1×TBS，再加入 0.5 毫升 Tween-20，轻柔搅拌混匀，最终 Tween-20 终浓度 0.05%。

直接配制 1 升 1×TBST 参考配方，Tris 碱 2.42g，氯化钠 8g，加水溶解后用浓盐酸调节 pH 至 7.6，定容到 995 毫升，最后加入 0.5 毫升 Tween-20。

配制注意事项，Tween-20 粘度大，吸取时尽量精准，加入之后不要剧烈震荡，避免产生大量泡沫。缓冲液室温短期存放可用，长期建议 4℃保存，如果液体出现浑浊、滋生微生物应当更换。

日常洗涤操作，每次洗涤浸泡 5 分钟，连续洗涤三到五次即可。吐温浓度可以根据实验背景调整，背景偏高时＊＊可上调至 0.1%，浓度过高有可能破坏抗原抗体结合，造成信号减弱。不要把 TBST 和电泳缓冲液、转膜缓冲液混用，防止成分交叉干扰。

若后续需要孵育抗体，建议使用同批次配制的 1×TBST 稀释一抗和二抗，保证洗涤与孵育缓冲环境一致。