快速转膜缓冲液1x 即用型水剂

快速转膜缓冲液1x 即用型水剂

商品化的 1× 即用快速转膜液大多为改良 Tris - 甘氨酸体系，属于无甲醇水剂，开瓶后可以直接使用，不需要额外添加甲醇或者乙醇。它离子强度高于传统 Towbin 转膜液，依靠高电流实现短时间转印，配方内含有微量 SDS，有助于大分子蛋白从凝胶中迁出，同时没有甲醇带来的凝胶收缩问题，pH 维持在 8.2 至 8.5 区间，适配常规 Laemmli 体系 SDS-PAGE 凝胶，PVDF 膜与 NC 膜都可以使用。

参考自制等效 1L 1× 快速转膜液配方，称取 Tris 3.03g、甘氨酸 14.4g、SDS 0.3g，使用超纯水充分溶解后定容至 1000 毫升，体系自然 pH 约 8.3，无需调节 pH。配制完成后不需要添加甲醇，针对疏水性极强的蛋白，可以酌情加入 5% 无水乙醇优化转印效果。

常规湿转条件参考，对于 1.0 毫米厚度凝胶，分子量小于 20kDa 的小分子蛋白采用 400mA 恒流转印 12 至 18 分钟，20 至 150kDa 常规蛋白转印 18 至 25 分钟，大于 150kDa 大分子蛋白转印 30 至 40 分钟。若是 1.5 毫米厚胶，整体转膜时间适当延长。环境温度高于 26 摄氏度时，槽内放置冰盒控温，避免缓冲液升温造成条带扭曲变形。

储存条件建议 4 摄氏度避光存放，长期室温放置容易出现缓冲液失效、液体浑浊，出现浑浊应当直接弃用。缓冲液最多重复使用一到两次，多次使用会造成离子损耗，转膜效率持续下降。PVDF 膜依旧需要使用甲醇浸润活化后，再放入转膜液平衡处理。不建议和电泳缓冲液互相混用，也不要自行大量添加甲醇，会破坏快速转膜体系平衡。

和传统 Towbin 转膜液相比，传统转膜液使用前需要加入 20% 甲醇，通常不含 SDS，转膜耗时更长；快速转膜即用液大多不含甲醇，添加微量 SDS，转印速度更快，大分子蛋白转出效果更优，凝胶收缩现象更轻微。

常见实验问题，条带信号微弱多半是转膜时间不足、电流不够或是缓冲液多次使用失效，也可能是胶和膜之间存在气泡。条带歪斜拖尾一般是缓冲液温度过高，滤纸、凝胶与膜大小不一致造成局部电流分布不均。小分子蛋白信号丢失代表发生穿膜，可以缩短转膜时长，更换 0.22μm 孔径 PVDF 膜进行试验。