SDS-PAGE电泳缓冲液

SDS-PAGE 电泳缓冲液

常用分为 Tris - 甘氨酸电泳缓冲液（Laemmli 体系，最通用），分5× 储存液与1× 工作液。

一、5× Tris - 甘氨酸电泳缓冲液（储存液）

配方（1 L）

Tris 碱：15.1 g

甘氨酸 (Glycine)：94 g

SDS：5.0 g

去离子水定容至 1000 mL

pH 约 8.3，不需要调 pH

使用

临用前稀释 5 倍 → 1× 工作液

1× 终浓度：25 mM Tris，192 mM 甘氨酸，0.1% SDS

二、配制要点

1. 先溶解 Tris、甘氨酸，最后再加 SDS；SDS 溶解会发泡，轻柔搅拌，不要剧烈震荡。

2. 室温避光保存，5× 缓冲液稳定数月；若出现沉淀丢弃。

3. 槽内工作液建议现稀释现用，重复使用不超过 2 次，多次使用离子强度下降，条带拖尾、迁移异常。

三、常见问题

1. 电泳跑不动、电流偏低

缓冲液稀释错误、反复多次使用离子耗尽、SDS 析出。

2. 条带歪斜、拖尾

缓冲液上下槽混用、工作液浓度不对、SDS 浓度不足。

3. 发泡严重

SDS 加过量，或剧烈摇晃缓冲液。

四、与转膜缓冲液区分（很多人混淆）

电泳缓冲液：含高浓度甘氨酸 + SDS，不含甲醇

Western 转膜缓冲液：含甲醇，SDS 含量很低或不加

补充：小型胶简易配制参考（5× 200 mL）

Tris 3.02 g + 甘氨酸 18.8 g + SDS 1.0 g，纯水定容 200 mL。