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树鼩(Tupaia belangeri)磷酸化P65蛋白 (p-P65)ELISA检测试剂盒

DM-QT46866
规格:促销价:
96T¥1920目录价¥2320
48T¥1440目录价¥2320
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产品详情

树鼩(Tupaia belangeri)磷酸化P65蛋白 (p-P65)ELISA检测试剂盒

本试剂盒只能用于科学研究,不得用于医学诊断


产品货号:DM-QT46866

产品规格:48/96T

ELISA 试剂盒,全称酶联免疫吸附试验试剂盒(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay Kit),是基于抗原 - 抗体的特异性免疫结合特性,搭配酶促信号放大体系,实现对生物样本中目标物质精准定性、**定量的商品化成套实验试剂。它是生命科学、生物医药领域最主流的蛋白类物质定量工具,也是你此前检测细胞培养上清中目标因子、验证样本冻存合规性的核心实验载体。



你检测细胞培养上清中蛋白类目标物,使用的几乎都是双抗体夹心 ELISA 试剂盒,这也是目前最主流的试剂盒类型,核心工作原理如下:

捕获阶段:将标准品、待测样本加入预包被了捕获抗体的酶标板孔中孵育,样本中的目标物会被捕获抗体特异性抓取,固定在孔底; 

洗涤去除杂质:洗去未结合的游离蛋白、培养基杂质等非特异性物质,仅保留结合在孔底的目标物; 

检测与信号放大:加入酶标检测抗体,与目标物的另一表位结合,形成 “捕获抗体 - 目标物 - 酶标检测抗体” 的夹心复合物,再次洗涤去除未结合的多余抗体; 

显色与读数:加入底物液,复合物上偶联的酶会催化底物显色,加入终止液终止反应后,用酶标仪读取 OD 值;最终通过标准品的浓度和对应 OD 值拟合标准曲线,即可换算出待测样本中目标物的精准浓度。 

根据检测目标物和反应模式,ELISA 试剂盒主要分为两类,你日常使用的以**类为主:

双抗体夹心 ELISA 试剂盒:适用于检测细胞因子、抗体、重组蛋白等大分子物质,也是细胞培养上清样本检测的金标准方案,特异性强、灵敏度高、可精准定量;



竞争法 ELISA 试剂盒:适用于检测激素、小分子多肽等分子量过小、无法同时结合两个抗体的物质,通过竞争结合的模式实现定量。 



ELISA 试剂盒之所以成为你这类细胞实验样本检测的**工具,核心优势在于:灵敏度极高,通过酶促信号放大可检测到 pg/mL 级别的微量目标物,完全适配细胞培养上清中低丰度细胞因子的检测;特异性极强,基于抗原 - 抗体的特异性结合,可精准识别目标物,几乎不受样本中其他蛋白的干扰;操作简便、通量高,预制体系无需自行优化,可同时检测数十个样本,适配批量细胞孔样本的检测需求;可实现**定量,通过标准品可精准换算出样本中目标物的具体浓度,而非仅定性判断阴阳,完全匹配你验证样本浓度是否符合冻存要求、合并后样本均一性的实验需求。


ELISA(酶联免疫吸附测定,Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)的核心原理是:抗原与抗体的特异性免疫反应 + 酶催化底物的化学显色反应,通过颜色深浅定量 / 定性判断样本中待测物浓度。



信号系统原理(HRP + TMB 最常见)

绝大多数 ELISA 用这套:

1.酶:辣根过氧化物酶(HRP)。

2.底物:TMB(四甲基联苯胺),无色。

3.反应:HRP 催化 H₂O₂氧化 TMB → 生成蓝色可溶性产物。

4.终止:加硫酸(终止液),蓝色变为黄色,稳定。

5.读数:450 nm 测 OD(参考波长 630 nm)。

方法

主要检测对象

信息与浓度关系

适用分子大小

典型应用

双抗体夹心法

抗原(蛋白)

正相关(浓度高→色深)

大分子(多表位)

小分子、半抗原

直接法

抗原

正相关

大分子

抗原定性、包被验证

间接法

抗体

正相关

抗体

病毒抗体、自身抗体、免疫滴度

竞争法

抗原(小分子)

负相关(浓度高→色浅)

小分子、半抗原

类固醇激素、药物、多肽、毒素

一句话总结

双抗体夹心法:捕获抗体抓抗原,酶标抗体再夹心,色深 = 浓度高。

间接法:抗原抓样本抗体,酶标二抗放大,色深 = 抗体高。

竞争法:样本与酶标物抢结合位点,色浅 = 浓度高。


试剂盒的组成

结果判断

一、显色与 OD 值初判(肉眼 + 酶标仪)

显色观察:标准品孔应呈梯度显色(TMB 底物终止后由蓝变黄);空白 / 阴性对照基本无色。 

OD 值质控(夹心法常用):空白孔 OD < 0.2 

**标准品 OD > 1.0 

样本 OD 需落在标准曲线范围内;超出上限→稀释重测;低于下限→浓缩或换高敏试剂盒 

二、标准曲线与对照验证(实验有效性)

标准曲线:相关系数 R² ≥ 0.99(越接近 1 越好) 

推荐用 四参数逻辑(4PL)拟合 

标准品 CV% < 8% 

对照孔:阴性对照(NC):背景低,过高提示非特异结合 

阳性对照(PC):应有明显信号,无信号则实验失败 

样本重复性:复孔 CV% < 10%(可靠);10%–15% 可接受;>15% 需重测 



三、结果判读方法

1. 定性判断(阴 / 阳)

计算 Cut-off 值(按试剂盒说明书,常见:NC 均值 + 2SD 或 NC×2.1) 

样本 OD > Cut-off → 阳性 

样本 OD < Cut-off → 阴性 

接近 Cut-off → 复测确认 

2. 定量判断(浓度计算)

用标准曲线将样本 OD 值换算为目标物浓度 

结果需在试剂盒检测范围内 

3. 半定量判断(效价 / 相对水平)

以**稀释倍数仍呈阳性为效价,用于抗体滴度等 


四、常见异常与处理

高背景 / 花板:优化封闭、洗涤,降低抗体浓度 

无显色 / 显色过浅:检查底物、抗体活性,延长孵育 

曲线 R² 低 / 点偏离:排查移液、标准品稀释、孵育条件 

复孔 CV 大:规范加样、洗板,减少边缘效应

(图片仅供参考)


笃玛小科普:样本OD值超出标准曲线的线性区间时,如何进行稀释?

做 ELISA、蛋白定量、核酸检测等比色 / 发光实验时,你一定遇到过这种情况:辛辛苦苦做完实验,结果发现部分样本的 OD 值要么 "爆表" 超出标准曲线上限,要么低得几乎和空白差不多。直接报告 "无法定量" 太可惜,随便稀释又可能导致结果偏差巨大。