大鼠（Rat）活性氧簇（ROS）ELISA检测试剂盒

大鼠（Rat）活性氧簇（ROS）ELISA检测试剂盒

产品货号：DM-F310

产品规格：[48/96T]

ELISA检测试剂盒的原理

酶联免疫吸附测定（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA）是一种将抗原 - 抗体特异性免疫反应与酶催化底物的化学显色反应相结合的高灵敏度、高特异性免疫分析技术。它通过将不可见的免疫反应转化为可定量的显色信号，实现对样本中极微量目标物质（如蛋白质、激素、抗体、病原体抗原等）的定性或定量检测。

核心原理

ELISA 的核心原理基于三个关键环节，所有类型的 ELISA 都遵循这一基本逻辑：

固相包被：将已知的抗原或抗体通过物理吸附的方式牢固固定于固相载体（通常为聚苯乙烯 96 孔微孔板）表面，并保持其免疫活性。

特异性结合与酶标记：利用抗原与抗体之间 "锁钥式" 的高度特异性识别与结合能力，使样本中的目标分析物与固相上的对应配体发生反应。同时，将酶（最常用的是辣根过氧化物酶 HRP 和碱性磷酸酶 AP）标记在抗体或抗原上，形成酶标结合物。该结合物既能与相应的抗体或抗原发生免疫反应，又保留酶的催化活性。

显色与定量：在反应体系中，结合在固相上的酶量与样本中待测物含量成比例。加入酶特异性底物后，底物被酶催化生成有色产物。通过酶标仪测定吸光度（OD 值），即可根据颜色深浅判断待测物的浓度。酶的高效催化作用可极大放大信号，使该方法具备极高的检测灵敏度，可检测 ng 甚至 pg 级别的微量物质。

主要类型及原理对比

根据实验设计和检测对象的不同，ELISA 主要分为以下四种类型：

1. 直接法 ELISA

原理：将抗原直接包被在固相载体上，加入酶标记的特异性一抗进行孵育，结合后酶催化底物反应显色。吸光度值与抗原浓度呈正相关。

优点：操作步骤少，耗时短，避免了二抗可能引起的交叉反应。

缺点：信号无放大作用导致灵敏度较低；每种待测物均需制备特异性酶标抗体，灵活性差；易因非特异性吸附导致背景较高。

应用场景：病原体快速定性检测、纯化蛋白定量、抗体筛选和抗原表位作图。

2. 间接法 ELISA

原理：将抗原固定于固相载体，先加入非酶标一抗与抗原结合，再加入酶标二抗（针对一抗的抗体）进行检测。吸光度值与一抗浓度呈正相关。

优点：通过二抗放大信号，灵敏度显著高于直接法；一种酶标二抗可适用于多种同种属来源的一抗，经济且灵活。

缺点：实验步骤增多，周期延长；二抗可能与固相抗原发生非特异性结合，潜在交叉反应风险。

应用场景：主要用于检测样本中的抗体，如病原体特异性 IgG/IgM、自身免疫病抗体滴定、过敏诊断等。

3. 双抗体夹心法 ELISA

原理：使用两种分别针对目标抗原不同表位的抗体。一种作为 "捕获抗体" 包被固相，加入样本后抗原被捕获；再加入另一种 "检测抗体"（可直接酶标记或通过酶标二抗间接检测），形成 "捕获抗体 - 抗原 - 检测抗体" 的三明治复合物。吸光度值与抗原浓度呈正相关。

优点：适用于多表位抗原检测，具有极高的特异性和灵敏度（可达 pg/mL 级），是应用最广泛的 ELISA 形式。

缺点：要求两种抗体不存在交叉反应，且不竞争同一结合位点，对抗体配对要求高。

应用场景：细胞因子检测（如 IL-6、TNF-α）、肿瘤标志物筛查（如 CEA、PSA）、激素水平测定、食品安全中蛋白质含量检测等。

4. 竞争法 ELISA

原理：将捕获抗体包被在固相载体上，同时加入样本中的目标抗原和酶标抗原，两者竞争结合有限的抗体结合位点。当样本中目标抗原浓度升高时，其与捕获抗体的结合会挤占酶标抗原的结合空间，最终催化底物产生的显色信号强度与目标抗原含量呈负相关。

优点：可检测缺乏多表位的小分子物质（如激素、药物代谢物、农药残留）或半抗原；竞争模型天然规避复杂样本中高丰度蛋白的干扰。

缺点：灵敏度相对较低；抗原结构类似物易引发假阴性 / 阳性信号；反向标曲增加数据分析复杂度。

应用场景：小分子激素检测、药物血药浓度监测、农药残留分析、生物毒素筛查等。

基本实验步骤

以最常用的双抗体夹心法为例，ELISA 实验的基本流程如下：

包被：将捕获抗体用包被缓冲液稀释至合适浓度，每孔加入 100μL，4℃孵育过夜或 37℃孵育 2 小时。

封闭：弃去孔内液体，洗涤后每孔加入 200μL 封闭液（如 1% BSA），37℃孵育 1 小时，阻断未结合包被物的空白位点。

加样：加入稀释后的样本和一系列浓度梯度的标准品，每孔 100μL，37℃孵育 1-2 小时。

加检测抗体：洗涤后加入酶标检测抗体，37℃孵育 1 小时。

显色：洗涤后每孔加入底物 A、B 液各 50μL，37℃避光显色 15-20 分钟。

终止反应：每孔加入 50μL 终止液（如 2mol/L H₂SO₄），此时颜色不再变化。

读数与分析：在终止反应后 15 分钟内，用酶标仪在 450nm 波长下测定各孔吸光度值，根据标准品绘制标准曲线，计算待测样本浓度。

技术优势与应用领域

主要优势

高灵敏度：酶的催化作用放大了免疫反应信号，可检测 pg 级别的微量物质

强特异性：基于抗原抗体的高度特异性结合，交叉反应率低

操作简便：流程标准化，易于掌握，适合批量检测

成本相对较低：相比质谱等高端技术更经济实用

可定量分析：通过标准曲线实现精确的定量检测

广泛应用

ELISA 技术凭借其优异的性能，已成为生物医学研究和临床诊断中不可或缺的工具，广泛应用于：

临床医学诊断：感染性疾病病原体抗原 / 抗体检测、肿瘤标志物定量、激素水平测定、治疗药物监测等

基础研究：细胞因子分泌水平分析、蛋白质表达定量、疫苗效价评估等

食品安全监测：农药残留分析、生物毒素筛查、抗生素残留检测等

畜牧兽医与动物检疫：动物疫病诊断、畜禽产品兽药残留检测等

环境监测：环境污染物检测、水质分析等

样品收集、处理及保存方法

1.  血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.  血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

3.  细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.  组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

5.  保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品

1.酶标仪（450nm）

2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒温箱

洗板方法

1.  手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。

2.  自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

生化试剂盒与ELISA试剂盒的核心区别

ELISA试剂盒免费代测服务详解

上海笃玛生物免费代测服务

上海笃玛生物科技有限公司为购买其 DUMABIO 品牌 ELISA 试剂盒的客户提供免费代测服务，这是该公司的核心增值服务之一。

服务内容

1.支持双抗体夹心法检测抗原、间接法检测抗体等多种 ELISA 技术

2.可检测血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液、胸腹水、脑脊液等多种标本类型

服务周期

1.一般在收到样本后的7 个工作日内出具实验报告

2.特殊情况可协商加急服务

交付结果

1.原始 OD 值数据

2.标准曲线及拟合方程

3.样本浓度计算结果

4.完整的实验报告

5.免费代测基本条件

6.样本质量要求：样本必须新鲜或正确保存，无明显溶血、脂血或污染

7.样本要求与处理

8.样本体积

9.每个检测孔至少需要100μL样本体积

10.建议按 "检测孔数 ×120μL" 准备，预留一定余量

11.如需做复孔检测，样本量需加倍

保存与运输

1.样本处理后应分装密封保存，避免反复冻融

2.贮藏：2-8℃，避光防潮保存。

3.有效期：6个月

4.邮寄时必须使用干冰运输，确保样本在运输过程中保持冷冻状态

标记要求

在样本管盖或管壁清晰标记样本编号

管口用封口膜封好，防止污染和泄漏

随样本提供详细的代测信息表，包括：

标本编号、所测项目、是否做复孔、实验后标本是否寄回

代测服务流程

咨询与订购：联系客服确认所需检测指标，订购对应 ELISA 试剂盒

样本准备：按照要求收集、处理和保存样本

样本寄送：将样本和代测信息表一起寄送至公司实验室

实验检测：专业技术人员按照标准 SOP 流程进行实验操作

数据分析：对实验数据进行整理和分析，生成标准曲线和样本浓度

报告交付：通过邮件或在线方式发送完整的实验报告

技术支持：提供后续的数据解读和实验咨询服务

注意事项

传染性样本：为保证实验室人员安全，不接受具有传染性疾病的样本

样本责任：客户需对所提供样本的真实性和合法性负责

实验失败处理：如因试剂盒质量问题导致实验失败，公司将免费重新检测；如因样本质量问题导致实验失败，需重新提供样本并可能收取相应费用

数据保密：公司对客户的实验数据和样本信息严格保密

免责声明

1.  试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。

2.  严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。