牛（Bovine）缬氨酸（Valine）ELISA检测试剂盒

牛（Bovine）缬氨酸（Valine）ELISA检测试剂盒

该试剂盒仅用于科研实验

产品货号：DM-Cat9890

产品规格：48/96T

一、ELISA 检测原理

ELISA（酶联免疫吸附测定）核心是抗原 - 抗体特异性结合 + 酶促显色反应，通过颜色深浅反映待测物浓度。常用类型及原理：

1. 双抗体夹心法（测大分子抗原 / 蛋白）

固相包被捕获抗体 → 加入样本（待测抗原）→ 结合酶标检测抗体 → 加底物显色 → 吸光度与抗原浓度正相关。

2. 间接法（测抗体）固相包被抗原 → 样本中待测抗体结合 → 加酶标二抗 → 底物显色 → 吸光度与抗体浓度正相关。

3. 竞争法（测小分子抗原 / 半抗原）待测抗原与酶标抗原竞争结合有限抗体 → 待测物越多，显色越浅 → 吸光度与浓度负相关。

二、试剂盒的组成

三、ELISA实验所需材料

（一）试剂盒本身（核心）

1. 预包被酶标板（96 孔）

2. 标准品（梯度浓度）

3. 酶结合物（酶标抗体 / 酶标抗原）

4. 样本稀释液

5. 洗涤液（浓缩液，使用前稀释）

6. 显色底物液（A、B 液或单液）

7. 终止液

8. 封板膜 / 封板胶

（二）样本相关

1. 待测样本（血清、血浆、细胞上清、组织匀浆等）

2. 样本处理试剂（视样本类型）：

抗凝剂（EDTA、肝素、柠檬酸钠等）

蛋白酶抑制剂（如组织样本）

裂解液、匀浆缓冲液等

（三）仪器设备

1. 酶标仪（450 nm 为主，部分需双波长）

2. 洗板机（推荐）或洗板瓶 / 排枪

3. 移液器（0.5–10 μL、10–100 μL、100–1000 μL）

4. 移液器吸头（带滤芯更佳）

5. 涡旋振荡器

6. 离心机（样本处理用）

7. 恒温培养箱 / 水浴（37℃ 孵育用）

8. 冰箱（2–8℃、-20℃）

（四）耗材与辅助用品

1. EP 管、冻存管

2. 一次性手套、口罩

3. 吸水纸 / 滤纸

4. 计时器

5. 去离子水 / 蒸馏水（用于洗涤液稀释）

6. 废液缸、吸水纸

（五）可选 / 特殊实验材料

1. 封板膜 / 封板胶

2. 振荡器（微孔板摇床）

3. 多道移液器（8/12 道）

4. 加样槽

5. 微孔板封口膜、铝箔（避光）

四、试剂准备的注意事项

1.所有试剂按说明书指定温度保存（2–8℃ 或 -20℃）

2.避免阳光直射，酶结合物、底物需避光

3.不同批号试剂不可混用

4.加样前检查试剂是否浑浊、沉淀、变色，异常则弃用

5.所有试剂开盖后尽快使用，剩余按要求保存

五、结果计算（通用流程）

1. 数据处理

（1）扣除空白孔 / 本底孔吸光度（OD），得到校正 OD 值。

（2）以标准品浓度为 X，校正 OD 为 Y，做标准曲线（常用四参数拟合 4PL）。 2.浓度计算

（1）样本 OD 代入标准曲线，得到理论浓度 C₀。

（2）若样本经稀释，最终浓度：C=C0×稀释倍数

2. 有效性判定（常见）

（1）空白 OD 通常 ≤ 0.1；

（2）标准曲线 R² ≥ 0.98；

（3）质控（QC）在可接受范围；

（4）样本 OD 超出曲线上限 / 下限时需重新稀释 / 浓缩复测。

六、示例（双抗体夹心法）

标准品浓度：0、10、20、50、100、200 pg/mL

测得 OD：0.05、0.12、0.25、0.58、1.10、1.95

校正后 OD：0、0.07、0.20、0.53、1.05、1.90

拟合曲线后，某样本校正 OD=0.35 → 曲线读出 C₀≈30 pg/mL若样本稀释 5 倍，则最终浓度 = 30 × 5 = 150 pg/mL。