游离脂肪酸(FFA)含量试剂盒
(测血清、动物组织、微生物、细胞)
微量法100管/96样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
游离脂肪酸,也称为非酯化脂肪酸,在与白蛋白结合的血浆中循环。动物血液中的游离脂肪酸 (FFA )含量是一项重要的生理生化指标。血清中游离脂肪酸的浓度与脂类代谢、糖代谢、内分泌功能有关,游离脂肪酸的浓度会因为糖尿病、重症肝障碍、甲状腺功能亢进等疾病而上升。
测定原理:
用有机溶剂萃取FFA。含有FFA的有机液与三乙醇胺铜反应,在有机相中形成脂肪酸铜 (铜皂) FFA一Cu。Cu离子与显色液反应形成紫红色络合物。反应形成的颜色深浅与Cu离子浓度的关系符合朗伯一比尔定律,因此可利用此反应进行比色。
自备的仪器和用品:
酶标仪、离心机、可调式移液器、96孔板、蒸馏水。

分类要点:
1. 酶活性检测:基于酶催化底物生成产物的速率定量;
2. 代谢物检测:通过特异性反应显色定量;
3. 免疫类(ELISA):双抗体夹心法形成三明治结构显色。
适用:动植物组织、微生物等样本精准检测。
试剂组成

注:部分试剂盒还包含酶标板、比色杯等耗材
储存与稳定性(以说明书为准)
常规储存:2-8℃冷藏,避免反复冻融
特殊要求:部分酶类或抗体试剂需-20℃冷冻保存
有效期:未开封通常12个月,开封后建议在规定时间内用完

结果计算
按标准曲线计算:含量=(测定管吸光值-空白值)÷(标准管吸光值-空白值)×标准品浓度÷样本量
所需仪器(自备)
分光光度计/酶标仪、离心机、水浴锅/金属浴、移液器、反应容器等
步骤阶段 | 核心操作内容 | 关键注意事项 |
操作前准备 | 1. 试剂室温平衡 15-30 分钟,检查外观 2. 样本预处理(离心 / 稀释) 3. 校准仪器,准备耗材 | 试剂勿反复冻融;避免溶血样本;仪器需校准 |
试剂配制 | 1. 单试剂直接摇匀;双试剂按比例配制 2. 梯度稀释标准品,复溶质控品 | 现配现用;禁止混用不同批次试剂 |
反应体系构建 | 1. 按空白→标准品→质控品→样本顺序加样,设复孔 2. 恒温孵育,按需加终止液 | 严控加样量;孵育温度 / 时间不更改;终止液沿壁加 |
信号检测 | 比色法读 OD 值;荧光 / 化学发光法按对应波长读数 | 擦拭比色杯;荧光检测需避光 |
数据分析判定 | 1. 绘制标准曲线(r≥0.99) 2. 计算样本浓度,超范围稀释重测 3. 验证质控结果 | 拟合方式遵说明书;浓度计算需乘稀释倍数 |
收尾与废弃物处理 | 理台面,试剂规范储存;分类处理生物废弃物 | 试剂做好开封记录;废弃物按生物安全要求处理 |
关键注意事项
试剂使用前充分混匀,按要求储存,避免反复冻融
严格控制反应温度和时间,确保操作规范
样本需新鲜,避免溶血、污染,采集后及时检测
操作时佩戴防护用品,废液按规范处理