二氢黄酮醇还原酶（Dihydro flavonol reductase，DFR）试剂盒

二氢黄酮醇还原酶（Dihydro flavonol reductase，DFR）试剂盒

分光光度法50管/24样

注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

二氢黄酮醇还原酶是类黄酮合成途径中的一个关键酶，在决定植物的花色、叶色、果色和其他经济器官的色泽及其营养品质方面起着重要作用。

测定原理

二氢黄酮醇还原酶作用于二氢槲皮素产生儿茶素，可与香草醛缩合形成红色化合物，在500nm处有特征吸收峰。

需自备的仪器和用品

研钵、低温离心机、震荡仪、氮吹仪、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、水浴锅、无水乙醇、乙酸乙酯。

试剂组成和配制

提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体30mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体3mL×1瓶，4℃保存。

试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加5mL蒸馏水溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

试剂四：液体40mL×2瓶，4℃避光保存。

分类要点：

1. 酶活性检测：基于酶催化底物生成产物的速率定量；

2. 代谢物检测：通过特异性反应显色定量；

3. 免疫类（ELISA）：双抗体夹心法形成三明治结构显色。

适用：动植物组织、微生物等样本精准检测。

试剂组成

注：部分试剂盒还包含酶标板、比色杯等耗材

生化试剂盒使用全程注意事项

一、 实验前准备注意事项

试剂管理严格按说明书温度解冻 / 平衡试剂：冷冻试剂（酶标物、标准品）需提前分装，避免反复冻融；冷藏试剂室温平衡 15-30 min，减少温度差对反应体系的影响。 

检查试剂状态：若出现浑浊、沉淀、变色、异味，或超出有效期 / 开封后使用期限，立即废弃。 

试剂混匀方式：解冻后轻柔颠倒混匀，禁止剧烈振荡，防止酶活性失活或产生气泡干扰检测。 

样本预处理样本需澄清无杂质，浑浊样本 4℃ 3000-5000 rpm 离心 10-15 min 取上清，或 0.22 μm 滤膜过滤；脂质污染样本加 1% Triton X-100 处理后离心。 

严格按说明书稀释样本，避免浓度超出检测线性范围；稀释用缓冲液需与试剂盒配套，禁止用水替代。 

仪器与耗材准备校准酶标仪 / 分光光度计波长，用空白孔调零，确保仪器处于正常工作状态。 

选用一次性无菌比色杯 / 酶标板，重复使用的玻璃器皿需＊＊清洗并灭菌，避免残留洗涤剂或污染物干扰反应。 

二、 实验操作注意事项

加样规范标记孔位（空白孔、标准品孔、样本孔、质控孔），避免混淆；建议按空白→标准品→质控品→样本的顺序加样。 

使用校准过的移液器，控制加样体积精准度；不同孔位更换吸头，防止交叉污染。 

加样时避免产生气泡，若有气泡可用移液器尖端轻轻刺破，或静置片刻待气泡消散。 

孵育反应控制严格遵循说明书的孵育温度（如室温、37℃）和时间，温度误差控制在 ±1℃内，孵育时间不得随意延长或缩短。 

避光反应需用锡箔纸包裹反应容器，防止光照导致底物分解；水浴孵育时确保反应容器完全浸入水中，避免边缘效应。 

终止反应操作需终止反应的试剂盒，到达孵育时间后立即加入终止液，加液顺序和体积与说明书一致；加液后轻柔混匀，避免剧烈振荡。 

三、 实验后处理注意事项

结果计算与验证绘制标准曲线时，确保 R²≥0.99；样本浓度需乘以稀释倍数，若超出标准曲线范围需重新稀释检测。 

对比质控品检测值与说明书给定范围，若超出范围需排查原因（试剂、操作、仪器）并重新实验。 

试剂与耗材处理未用完的试剂按组分特性分类保存（冷藏 / 冷冻 / 室温），密封瓶口并标注开封日期；冷冻试剂分装后避免再次冻融。 

实验废液按生物安全要求处理，一次性耗材（吸头、酶标板）需高压灭菌后丢弃，防止污染环境。 

数据记录与追溯完整记录实验信息：试剂批号、有效期、孵育条件、仪器参数、样本信息等，便于结果追溯和问题排查。

结果计算

按标准曲线计算：含量=（测定管吸光值-空白值）÷（标准管吸光值-空白值）×标准品浓度÷样本量

所需仪器（自备）

分光光度计/酶标仪、离心机、水浴锅/金属浴、移液器、反应容器等

关键注意事项

试剂使用前充分混匀，按要求储存，避免反复冻融

严格控制反应温度和时间，确保操作规范

样本需新鲜，避免溶血、污染，采集后及时检测

操作时佩戴防护用品，废液按规范处理

生化试剂盒的保存条件

生化试剂盒的保存需严格遵循说明书要求，核心原则是按组分类型分类保存、避免反复冻融、控制温度波动，具体条件如下：

通用保存温度分类

• 2~8℃冷藏保存：适用于多数常规试剂组分，如缓冲液、底物液（非酶类）、稀释液、显色剂等。这类试剂对温度相对不敏感，冷藏可维持其化学稳定性，避免室温下成分降解。

• -20℃冷冻保存：适用于酶类试剂（如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶）、标准品、质控品、抗体 / 抗原等生物活性成分。冷冻可抑制酶活性衰减和蛋白降解，需注意分装为小体积，防止反复冻融导致活性丧失。

• -80℃超低温保存：针对特殊敏感组分（如 RNA 酶抑制剂、高活性蛋白、稀有标准品），长期保存需超低温环境，降低分子运动速率，延长保质期。

• 室温保存（15~25℃）：仅限部分稳定性极高的组分，如干燥剂、终止液（强酸 / 强碱类）、固体试剂等，需密封置于阴凉干燥处，避免潮湿和阳光直射。

  关键保存注意事项

• 避免反复冻融：冷冻试剂首次解冻后，建议按需分装成若干小份，后续使用时仅解冻所需量，反复冻融会破坏蛋白和酶的空间结构，导致活性下降。

• 避光保存：显色剂、荧光底物、酶标记物等对光照敏感，需用棕色瓶或锡箔纸包裹容器，防止光照引发氧化反应，影响试剂性能。

• 密封防污染：所有试剂瓶需拧紧瓶盖，防止挥发、渗漏或微生物污染；开封后建议标注开封日期，优先使用。

• 温度稳定性控制：转运或取放试剂时，需使用冰袋或低温保温箱，缩短室温暴露时间（＜30 min）；避免将试剂置于冰箱冷冻室与冷藏室交界处，防止温度反复波动。

• 特殊组分单独保存：部分试剂盒含易挥发（如有机溶剂）、易潮解组分，需单独密封存放，必要时放置干燥剂。

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