乙醛脱氢酶(acetaldehyde dehydrogenase,ALDH)试剂盒
微量法100T/96S
注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
乙醛脱氢酶 (EC 1.2.1.10)是醛脱氢酶的一种,广泛存在于各种动物、植物和微生物体内。主要作用是将乙醛氧化成乙酸,在酒精代谢中起主要作用。在人类和许多动物体内,线粒体乙醛脱氢酶能把对生物体有害的醇类转化,所以在细胞解毒研究中乙醛脱氢酶受到高度关注;同时,乙醛脱氢酶在分子生物学以及相关疾病的检测方面有较广泛的研究应用。
测定原理
在辅酶Ⅰ存在的条件下,乙醛脱氢酶催化乙醛和NAD+转化为乙酸和NADH,在340nm处的吸光值会增加,测定340nm处的吸光值变化,可计算得到乙醛脱氢酶的活性。
自备实验用品及仪器
天平、离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水。
试剂组成和配制
提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体6mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体2mL×1瓶,4℃避光保存。
试剂三:液体1mL×1支,4℃避光保存。
试剂四:液体1mL×1支,4℃保存。
试剂五:液体1mL×1支,4℃保存。

分类要点:
1. 酶活性检测:基于酶催化底物生成产物的速率定量;
2. 代谢物检测:通过特异性反应显色定量;
3. 免疫类(ELISA):双抗体夹心法形成三明治结构显色。
适用:动植物组织、微生物等样本精准检测。
试剂组成

注:部分试剂盒还包含酶标板、比色杯等耗材
储存与稳定性(以说明书为准)
常规储存:2-8℃冷藏,避免反复冻融
特殊要求:部分酶类或抗体试剂需-20℃冷冻保存
有效期:未开封通常12个月,开封后建议在规定时间内用完

结果计算
按标准曲线计算:含量=(测定管吸光值-空白值)÷(标准管吸光值-空白值)×标准品浓度÷样本量
所需仪器(自备)
分光光度计/酶标仪、离心机、水浴锅/金属浴、移液器、反应容器等
步骤阶段 | 核心操作内容 | 关键注意事项 |
操作前准备 | 1. 试剂室温平衡 15-30 分钟,检查外观 2. 样本预处理(离心 / 稀释) 3. 校准仪器,准备耗材 | 试剂勿反复冻融;避免溶血样本;仪器需校准 |
试剂配制 | 1. 单试剂直接摇匀;双试剂按比例配制 2. 梯度稀释标准品,复溶质控品 | 现配现用;禁止混用不同批次试剂 |
反应体系构建 | 1. 按空白→标准品→质控品→样本顺序加样,设复孔 2. 恒温孵育,按需加终止液 | 严控加样量;孵育温度 / 时间不更改;终止液沿壁加 |
信号检测 | 比色法读 OD 值;荧光 / 化学发光法按对应波长读数 | 擦拭比色杯;荧光检测需避光 |
数据分析判定 | 1. 绘制标准曲线(r≥0.99) 2. 计算样本浓度,超范围稀释重测 3. 验证质控结果 | 拟合方式遵说明书;浓度计算需乘稀释倍数 |
收尾与废弃物处理 | 理台面,试剂规范储存;分类处理生物废弃物 | 试剂做好开封记录;废弃物按生物安全要求处理 |
关键注意事项
试剂使用前充分混匀,按要求储存,避免反复冻融
严格控制反应温度和时间,确保操作规范
样本需新鲜,避免溶血、污染,采集后及时检测
操作时佩戴防护用品,废液按规范处理
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