植物半胱氨酸蛋白酶 ELISA检测试剂盒

植物半胱氨酸蛋白酶

ELISA检测试剂盒

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断

检测范围：

反应性：植物

检测范围：1.56-100ng/mL

灵敏度：＊＊检测浓度小于0.68ng/mL

检测原理

试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被捕获抗体的微孔板中，先加入标本、标准品，经过温育并＊＊洗涤。再加入HRP标记的检测抗体，再次温育并＊＊洗涤。最后加入底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测物呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

样品收集、处理及保存方法

将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品

1. 酶标仪（450nm）、37℃恒温箱等

2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

操作注意事项

1. 试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

2.  实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

3.  严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

4.所有液体组分使用前充分摇匀。

试剂盒组成

试剂的准备

1. 1×洗液的配制：浓缩洗液（20×）如有晶体析出，需在37℃下加热至晶体全部溶解后使用。用蒸馏水1:20稀释，例如：10mL浓缩洗涤液加入190mL的蒸馏水，混合均匀。

2. 1×通用稀释液的配制：用蒸馏水1:20稀释，例如：10mL的20×浓缩通用稀释液加入190mL的蒸馏水，混合均匀。

3. 1×酶标抗体工作液的配制：100×酶标抗体用“1×通用稀释液”按1:100倍稀释，例如：10uL的（100×）酶标抗体加入990uL的“1×通用稀释液”，混合均匀。配制好的1×酶标抗体工作液可以在2~8℃保存8h。

4. 工作校准品的配制：准备7个离心管，将10×校准品按需吸取一定量用“标准品稀释液”稀释10倍配制成校准品S1。例：50uL的10×校准品+450uL的“标准品稀释液”，制备得到500μL的S1浓度校准品。在随后的6个离心管中分别加入250μL的“标准品稀释液”，在这6个试管中（S2~S7）将S1校准品依次倍比稀释6个梯度至S7，共配制7个浓度的校准品，依次为：S1~S7。            “标准品稀释液”作为空白校准品S0。

洗板方法

1. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。

2. 自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

操作步骤 

结果判断

绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。

试剂盒性能

1.  准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。

2.  灵敏度：＊＊检测浓度小于0.68ng/mL。

3.  特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4.  重复性：板内、板间变异系数均小于15%。

5.  贮藏：2-8℃，避光防潮保存。

6.  有效期：6个月

免责声明

1.   试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。

2.   严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。

技术支持

电话：400-9681786

电子邮件：dm_support@sina.com

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生产厂家：上海笃玛生物科技有限公司