淀粉含量检测试剂盒说明书

淀粉含量检测试剂盒说明书

可见分光光度法

注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

货号：DM-SP10018

规格：50T/48S

产品内容：

试剂一：液体 50mL×1 瓶，4℃保存；

试剂二：液体 20mL×1 瓶，4℃保存；

试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存；

标准品：粉剂×10mg支，4℃保存；临用前加入 1mL 蒸馏水溶解，制备 10mg/mL 葡萄糖标准液。

产品说明：

淀粉是植物中糖的主要储存形式，其含量测定对于评价食品营养价值和调查植物体内糖代谢都 有重要意义。

利用80％乙醇可以把样品中可溶性糖与淀粉分开，进一步采用酸水解法分解淀粉为葡萄糖，采 用蒽酮比色法测定葡萄糖含量，即可计算淀粉含量。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、玻璃比色皿、研钵、冰、浓硫酸（不允许快递）、 蒸馏水。

操作步骤：

一、淀粉提取：

1 、称取约 0. 1g 样品于研钵中研碎，加入 1mL 试剂一，充分匀浆后转移到 EP 管中，80℃水浴提取 30min ，3000g ，常温离心 5min ，弃上清，留沉淀。

2 、沉淀中加入0.5mL 双蒸水，放入沸水浴中糊化 15min（盖紧，以防止水分散失）。

3 、冷却后，加入 0.35mL 试剂二，常温提取 15min ，振荡 3-5 次。

4 、加入 0.85mL 双蒸水，混匀，3000g ，常温离心 10min ，取上清液。

5 、取上清液 100μL 加入 700μL 蒸馏水后即进行了八倍稀释测定。注：若稀释八倍后样品吸光度大 于 1.5 或小于 0.1 ，建议将样品再进行适当稀释或浓缩后测量。

标准溶液准备：

将10mg/mL 葡萄糖标准液进行二倍稀释得到 0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125、 0.00156mg/mL 标准溶液备用。

二、测定操作表：

1 、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 620nm ，蒸馏水调零。

2 、调节水浴锅至 95℃。

3 、工作液的配制：临用前在试剂三中加入 13.5mL 蒸馏水后，缓慢加入 76.5mL 浓硫酸，不断搅拌， 充分溶解，待用。

4 、标准品测定：取 0.2mL 标准溶液（蒸馏水做空白）和 1mL 工作液至 EP 管中，95℃水浴 10 min  （盖紧，防止水分散失），自然冷却至室温，在 620 nm波长下测定吸光度值 A 标准及A 空白。计算 ΔA=A 标准-A 空白。

5 、样本测定：取0.2mL样本和1mL工作液至EP管中，95℃水浴10 min（盖紧，防止水分散失）， 自 然冷却至室温，在620 nm  波长下测定吸光度值A测定。ΔA´=A测定- A空白。

三、淀粉含量计算：

1 、标准曲线绘制：

以 0.2 、0.1 、0.05 、0.025 、0.0125 、0.00625 、0.003125 、0.00156mg/mL 葡萄糖标准溶液为横坐  标，ΔA 为纵坐标绘制标准曲线，得到线性回归方程 y=kx+b ，将ΔA´代入方程得到 x（mg/mL）； 2、 淀粉含量计算：

（1）、按照蛋白浓度计算

淀粉含量(mg/mg prot)=x×稀释倍数×V 提取÷（Cpr×V 提取）=8x÷Cpr

2 、按样本鲜重计算

淀粉含量(mg/g 鲜重)=x×稀释倍数×V 提取÷W= 13.6x÷W

V 提取：提取后体积，1.7 mL；Cpr：样本提取后蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g；稀

释倍数：8。

注意事项：由于工作液具有强腐蚀性，请谨慎操作。

本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！