狗血清（无菌过滤）

   狗血清（无菌过滤）

         狗血清采用健康狗血液为原料，经无菌采集、分离、微孔过滤后而成，性状为澄清液体，无噬菌体、低内毒素，无溶血无异物无细菌真菌支原体霉形体衣原体等，适用于试验室或生化科研相关试验，满足不同科研实验的多种需求。狗血源以封闭的穿刺方式采自动物，产品经3次100nm过滤，在净化车间过滤包装。经严格检测确保无支原体，细菌病毒检测依据美国药典（USP）和美国联邦法规第九篇（9CFR），符合国际检测标准。

产品来源

    狗血清采用健康狗血液为原料，经无菌采集、分离、微孔过滤后而成，性状为澄清液体，无噬菌体、低内毒素Chemicalbook，无溶血无异物无细菌真菌支原体霉形体衣原体等，适用于试验室或生化科研相关试验，满足不同科研实验的多种需求

储存条件

    需要长期保存的血清必须储存于-20℃-70℃低温冰箱中.4℃冰箱中保存时间切勿超过1个月.由于血Chemicalbook清结冰时体积会增加约10%,因此,血清在冻入低温冰箱前,必须预留一定体积空间,否则易发生污染或玻璃瓶冻裂.

狗血清和血浆的制备：

狗血清和狗血浆均是不含细胞（包括血小板）等有形成分的血液液体部分，其主要区别是血清不含凝血因子和血小板，血浆则含有凝血因子，它们的制备方法如下：

1.狗血清的制备：获得的血液不能抗凝，盛于离心管或可以离心的器皿中，静置或置37℃环境中促其凝固，待血液凝固后，将其平衡后离心（一般为3000rpm，离心5～10min），得到的上清液即为血清，可小心将上清吸出（注意切勿吸出细胞成分），分装备用。

2. 狗血浆制备：在盛血的容器中先加人一定比例的抗凝剂（抗凝剂：血液=1：9，将血液加到一定量后颠倒混匀，离心（离心条件同上）后所得的上清液即为血浆。初用者将上清移至另一清洁容器，吸出血浆时用毛细吸管贴着液面逐渐往下吸，切忌不能吸起细胞成分。

狗血清和狗血浆的主要区别：

1，血浆是离开血管的全血经抗凝处理后，通过离心沉淀，所获得的不含细胞成分的液体，其中含有纤维蛋白原（纤维蛋白原能转换成纤维蛋白，具有凝血作用），若向血浆中加入钙离子，血浆会发生再凝固，因此血浆中不含游离的钙离子。

2，血清是离体的血液凝固之后，经血凝块聚缩释出的液体，其中已无纤维蛋白原，但含有游离的钙离子，若向其中再加入钙离子，血清也不会再凝固。

3， 血浆与血清的另一个区别是：血清中少了很多的凝血因子，以及多了很多的凝血产物。另外，血清中含有特异性免疫抗体（如抗毒素或凝集素）的免疫血清（抗菌素血清）。简单说血浆里含有血清和血细胞

狗血清（无菌过滤），注意事项：有少量蛋白质结块析出不影响使用。未融化或融化未经摇匀的血清禁止直接放入高温水浴内加温。减少血清重复冻融。血清在室温或4℃冰箱内放置过久会影响促细胞生长效果。

狗血清的解冻：

        将血清从冰冻区中取出后（切勿直接将血清从-20℃进入37℃解冻，这样因温度改变太大，容易造成蛋白质凝集而出现沉淀），先置于2～8℃区域中使之融化，然后在室温下使之全融。使用前再预温到将使用的温度（如37℃），但必须注意的是，解冻过程中应轻轻地摇晃均匀。血清在解冻过程中可能会出现少量絮状或片状析出物，主要是血清中脂蛋白的变性或是纤维蛋白（形成凝血的蛋白之一）析出，但这些析出物，并不影响血清本身的质量。若一次无法用完一瓶，建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。

狗血清的应用

狗血清可用于ELISA抗体检测实验：

钩端螺旋体外膜蛋白血清学诊断价值和CTB-OmpL1疫苗免疫保护作用评价实验中为提高血清学检测的敏感性和特异性，克隆、表达LipL21,Loa22,LipL32和LigACon4-8，并以这4种重组蛋白为抗原，建立检测马和狗血清中相应抗体的ELISA和狗血清中相应抗体的LUMINEX法，为研制诊断钩体病的新血清学检测方法奠定实验基础。

应用分子生物学方法，构建CTB-OmpL1重组乳酸菌口服疫苗，并利用仓鼠模型评价其免疫保护作用，为研制新型疫苗奠定基础。研究内容与方法：

1.采用PCR方法，从钩端螺旋体基因组DNA中分别扩增LipL21,Loa22,LipL32和LigACon4-8基因片段，构建原核表达载体LipL21-PET28/Rosetta,Loa22-PET28/Rosetta,LipL32-PGEX4T2/BL21，LigACon4-8–PET28/Rosetta，大量诱导表达重组菌，运用Ni+NTA及正负离子吸咐柱纯化获得重组蛋白,用Wester blot鉴定。

2.以重组蛋白LipL21,Loa22,LipL32和LigACon4-8为抗原，建立检测马血清和狗血清中相应抗体的ELISA，用建立的ELISA检测大量临床马血清和狗血清并与传统MAT比较，评价其诊断价值。

3.以重组蛋白LipL21,Loa22,LipL32和LigACon4-8为抗原，建立检测狗血清中相应抗体的Luminex法,检测大量临床狗血清中相应抗体,并与传统MAT比较，评价其诊断价值。

4.用基因工程技术，克隆、表达钩端螺旋体重组蛋白CTB-OmpL1，转入乳酸菌中制备CTB-OmpL1口服疫苗；制备仓鼠钩体感染动物模型，通过该模型评价该口服疫苗的免疫保护作用。

目前国内血清的质量标准是2005版的《中华人民共和国药典》，主要指标有以下几点：

1、内毒素标准为不高于5EU/ml。内毒素是细菌破碎后细胞壁的成分，因此内毒素含量的高低可表现出采血到生产一系列过程中的无菌操作情况。目前，国产血清基本都能达到这一要求，很多进口胎牛血清内毒素含量反而更高，只要求不高于50EU/ml，高出我国标准10倍，即使是16000，也要10EU/ml，血清质量也未见影响。可见，内毒素含量偏高不影响质量，除非含量极高，预示着已经污染。

2、总蛋白含量

胎牛血清一般范围是30-40mg/ml，数值偏高，说明采血的牛龄偏大，不是胎牛，数值偏低，表明血清可能掺水了。

3、血红蛋白标准为不高于20mg/dl，颜色越红，数值越高，反之，数值越低。

4、pH国产血清，大多高于7.5，进口胎牛血清，大多低于7.5，具体原因未知，可能和牛龄有关，这也能用来初步鉴别血清的来源。

5、微生物包括细菌、霉菌、支原体、噬菌体、各类病原性病毒等。随着国内血清厂家生产条件的改善提高，细菌、霉菌等&ldquo；大型&rdquo；微生物几乎能100%控制，支原体经过0.1um过滤，大多也能清除。大肠杆菌噬菌体的污染还是比较严重的，主要是生产环境过程中带入，又无法过滤，很难＊＊清除，但对血清质量影响不大。病原性病毒，特别是BVDV，在国产血清中几乎90%以上都存在，这类微生物是影响国产血清质量的重要因素之一，而进口胎牛血清中基本都控制的很好。

6、免疫球蛋白国产血清的只是定性检测，结果也很不准确，进口胎牛血清大多定量检测。免疫球蛋白的数值能完全体现出采血的时的牛龄情况，国产血清，基本都是新生牛的，血清中容易产生IgM，IgG的含量也偏高，进口胎牛血清，不含IgM，IgG的含量也较低。

7、其它不管是国产还是进口血清，都是不测抗生素的（无四环素胎牛血清除外）。国外，抗生素的使用很严格，用量也很少，每头奶牛的产品包括血清都可以溯源的，因此可以做到胎牛血清中不含抗生素或含量极低；国内，抗生素的滥用已成了普遍现象，血清中残留很高，对细胞培养极为不利，这是国产血清质量差的根本原因。

血清使用注意事项：

防止发病免疫血清多用马、牛血液制备，马、牛血清对其它动物来说，也具有抗原性，有引起血清病的可能，因此，使用免疫血清要注意防止引起血清病，预防的主要措施是使用提纯的制品，不用不合格的产品；另外，不要有急功近利的想法，要按照要求剂量使用，一次用量不可过大。