小鼠纤连蛋白1(FN-1)ELISA试剂盒ELISA试剂盒技术流程  双抗体夹心法(检测未知抗原)间接法(检测未知抗体)1、用缓冲液将抗体稀释至1-10ug/ml。在反应孔中加0.1ml，4℃ 过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次。2、加样：加一定稀释的待检样品0.05ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育1小时。然后洗涤(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。3、加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.05ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤。4、加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。5、终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml6、结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。1、用包被缓冲液将已知抗原稀释至1-10ug/ml， 每孔加0.1ml，4℃过夜。次日洗涤3次。2、加样：加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.05ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)3、加酶标抗体：于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.05ml，37℃孵育30-60分钟，洗涤,＊后一遍用DDW洗涤。4、加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。5、终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml6、结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。 ELISA试剂盒需自备的设备及试剂    1. 450±10nm滤光片的酶标仪(建议仪器使用前提前预热)2. 单道或多道微量加液器及吸头3. 稀释样品的EP管4. 蒸馏水或去离子水5. 吸水纸6. 盛放洗液的容器 性能:1．准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。2．灵敏度：检测浓度小于10 pg/ml。3．特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。4．重复性：板内、板间变异系数均小于15%。 ELISA试剂盒优点：1、高效、灵敏、特异的抗体；2、重复性和可靠性高；3、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相载体；4、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型；5、可检测指标齐全：细胞因子检测、心肌梗塞检测、内分泌检测、肝纤维化检测、自身免疫检测、肿瘤标志物检测、传染病检测、特种蛋白检测、优生优育检测等等；6、价格优惠，质量保证，限度的节省实验经费。 实验步骤1. 使用前将所有的试剂和标本缓慢均衡至室温(18-25oC)，试剂不能直接在37oC溶解。2. 标准品(冻干品)：每瓶标准品加入标准品稀释液1mL，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为2000pg/mL。准备7个稀释标准品的EP管，每个EP管中加入150μL的标准品稀释液，如图所示依次倍比稀释成不同的梯度， 标准品稀释液(0pg/mL)直接作为空白孔。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。 3. 浓洗涤液：用580mL蒸馏水或去离子水将20mL浓洗涤液稀释至600mL，进行30倍稀释。 注意事项剂盒的储存及有效期1. 未开封的试剂盒：所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存。请注意，收到试剂盒后请尽快将TMB 洗涤液，终止液保存于4℃，其他试剂保存于-20℃。2. 使用后的试剂盒：剩余试剂仍需按照试剂瓶标签所示的温度保存，开封后的酶标板要加干燥剂后密封保存于-20℃，避免潮湿。 须知：试剂盒内酶标条可拆卸，按实验需求可分多次使用；使用后的剩余试剂盒建议在首次实验后1个月内使用完毕。产品过期时间以盒子上的标签为准，保质期内所有组分都确保是稳定的。 ELISA试剂盒报1、ELISA标准曲线；2、详细的实验步骤；3、完整的实验报告（试剂耗材，实验方法，实验结果及结果说明）； [样本处理及要求]1.  血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。2.  血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。3.  组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。＊后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。4.  细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。注：标本溶血会影响＊后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。 [需要而未提供的试剂和器材]1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱4.蒸馏水或去离子水 ELISA检测试剂盒承诺公司长期与各大高校、医院及权威科研单位保持着良好的合作关系，公司的产品质量及服务态度得到了他们的一致认可。笃玛生物本着客户至上的原则为客户提供优质产品，公司承诺产品有任何质量的问题免费包退换（非人为因素造成的）。公司提供免费代测服务，并且承诺收到样本七个工作日出结果，确保数据的准确性 小鼠纤连蛋白1(FN-1)ELISA试剂盒试验原理：本试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知待测物质浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将待测物质和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中待测物质的浓度呈比例关系。完整的ELISA试剂盒包含以下各组分：（1）已包被抗原或抗体的固相载体（免疫吸附剂）；（2）酶标记的抗原或抗体（结合物）；（3）酶的底物；（4）阴性对照品和阳性对照品（定性测定中），参考标准品和控制血清（定量测定中）；（5）结合物及标本的稀释液；（6）洗涤液，在板式ELISA中，常用的稀释液为含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水；（7）酶反应终止液，常用的HRP反应终止液为硫酸，其浓度按加量及比色液的*终体积而异，在板式ELISA中一般采用2mol/L。 ELISA试剂盒实验数据的计算处理方法1、拟和曲线：输入第一行： 浓度值， 如0 10 50 100 400输入第二行：该浓度下的调整后的od值，如0 0.586 1.397 1.997 3.42选择这些输入的数据，用插入里的图表按钮，进入图表向导，在“标准类型”中选择“xy散点图”;在“子图表类型”中选择“折线散点图”，按“下一步”;选择“系列产生在行”，按“下一步”;数据标志，可以填写：如数据y轴，OD值;数据x轴，浓度;按下一步，点击完成。可得曲线图。单击曲线，按右键，选择“添加趋势线”，在类型中，选择多项式;在选项中，选择显示公式，选择显示R平方值。得到公式和R平方值。也可以用上面说的方法： 双击图表，把它输入到图表的数据中，就可以拟和曲线。 2、计算浓度：第一次实验：标准曲线为：y = -4E-05x2 + 0.026xR2 = 0.9745为例，已知OD值，计算浓度。由于y = -4E-05x2 + 0.026x，可以得到：4E-05x2 -0.026x +y=0ax2 +bx +y=0特别说明:#.一周内使用可存于4℃，需长时间存放或多次使用建议存于-20℃.化学发光免疫分析试剂盒1.在各孔中加入标准品或样品各100μL，37°C孵育90分钟2.倒去孔内液体，拍干，加入100μL生物素化抗体工作液，37°C孵育 60分钟3.洗涤3次4.加入 100μL酶结合物工作液，37°C孵育 30分钟5.洗涤5次6.加入100μL 发光底物混合液，37°C孵育5分钟左右7.立即测定各孔的化学发光值8.结果计算 ELISA试剂盒优势：1、抗体----高效、灵敏、特异性好2、规范包被操作----吸附均匀、吸附性好、空白值低、孔底透明度高3、优化方案----重复性高，可靠性强4、高标准技术服务要求：灵敏度高，特异性强 5、适用范围广：血浆、血清、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等多种类型的样本 ELISA试剂盒操作步骤：1.使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。2.根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。3.加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的*标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。4.甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。5.每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。6.甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。7.每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。8.取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。9.在450nm波长处测定各孔的OD值。 服务承诺：一、产品品质保障（打造高品质产品，若产品质量存在任何问题，公司一律包退包换，质量有保障，解除了客户的后顾之忧）二、提供免费代测服务（我司拥有专业酶免技术的工作人员为客户提供来样检测服务,限度实验结果的有效性）三、提供全程技术指导（专业的科顺技术人员进行指导）四、全天在线服务（如果您在使用ELISA试剂盒产品时有任何的疑问，或者对我们有任何意见建议，您都可以通过来电或咨询。） [说明]1.由于现有条件及科学技术水平尚不能对所有供货商提供的所有原料进行全面的鉴定与分析，本产品可能存在一定的质量技术风险。2.＊终的实验结果与试剂的有效性、实验者的相关操作以及当时的实验环境密切相关，请务必准备充足的标本备份。3.不同批次的同一产品可能会有少许差别，如：检测限、灵敏度以及显色时间等，请依据试剂盒内说明书进行实验操作，网站电子版说明书仅作参考。4.只有全部使用本试剂盒配套试剂才能保证检测效果，不能混用其他制造商的产品。只有严格遵守本试剂盒的实验说明才会得到＊佳的检测结果。5.本公司只对试剂盒本身负责，不对因使用该试剂盒所造成的样本消耗负责，请使用者使用前充分考虑到样本的可能使用量，预留充足的样本。6.使用化学裂解液制备的组织匀浆或细胞提取液可能会由于某些化学物质的引入导致ELISA实验结果偏差。7.若样本为细胞培养上清，因该类样本干扰因素较多，如：细胞状态、细胞数量、采样时间等，所以可能存在检测不出的情况。8.某些天然蛋白或重组蛋白，包括原核及真核重组蛋白，可能因为与本产品所使用的检测抗体及捕获抗体不匹配，而不被检测出。 ELISA检测试剂盒承诺公司长期与各大高校、医院及权威科研单位保持着良好的合作关系，公司的产品质量及服务态度得到了他们的一致认可。笃玛生物本着客户至上的原则为客户提供优质产品，公司承诺产品有任何质量的问题免费包退换（非人为因素造成的）。公司提供免费代测服务，并且承诺收到样本七个工作日出结果，确保数据的准确性。   

 小鼠（Mouse）免疫球蛋白 G（IgG）ELISA 检测试剂盒 检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往 预先包被免疫球蛋白M（IgM）抗体的包被微孔中，依次加入标本、 标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显 色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成 ＊终的黄色。颜色的深浅和样品中的免疫球蛋白M（IgM）呈正相关。 用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。样品收集、处理及保存方法1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细 胞刺激，收集血液后，3000 转离心 10 分钟将血清和红细胞迅速小心 地分离。 2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心 30 分钟取上清。3. 细胞上清液：3000 转离心 10 分钟去除颗粒和聚合物。 4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心 10 分钟 取上清。5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存 于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。自备物品 1. 酶标仪（450nm） 2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 3. 37℃恒温箱 操作注意事项 1. 试剂盒保存在 2-8℃，使用前室温平衡 20 分钟。从冰箱取出的 浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解 后再使用。2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保 存。3. 浓度为 0 的 S0 号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明 书操作时样本已经稀释 5 倍，＊终结果乘以 5 才是样本实际浓度。4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。5. 所有液体组分使用前充分摇匀。 试剂盒组成 名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板 12 孔×8 条12 孔×4 条无标准品0.3ml*6管0.3ml*6管无样本稀释液6ml3ml无检测抗体-HRP10ml5ml无20×洗涤缓冲液25mL15ml按说明书进行稀释底物A6ml3ml无底物B6ml 3ml无终止液6ml3ml无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、1.25、2.5、5、10、20 g/L 试剂的准备 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按 1：20 稀释，即 1 份的 20×洗涤 缓冲液加 19 份的蒸馏水。 洗板方法 1. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置 1min 后甩尽 孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板 5 次。 2. 自动洗板机：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。 操作步骤 1. 从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自 封袋密封放回 4℃。 2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品 50μ L； 3. 样本孔先加待测样本 10μL，再加样本稀释液 40μL；空白孔不 加。 4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶 （HRP）标记的检测抗体 100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅 或恒温箱温育 60min。 5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置 1min，甩去 洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板 5 次（也可用洗板机洗板）。 6. 每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。 7. 每孔加入终止液 50μL，15min 内，在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。 结果判断 绘制标准曲线：在 Excel 工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应 OD 值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样 本浓度值。 试剂盒性能 1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数 R 值，大于等于 0.9900。 2. 灵敏度：＊低检测浓度小于 0.1 g/L。 3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。 4. 重复性：板内、板间变异系数均小于 15%。5. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。6. 有效期：6 个月 免责声明 1. 试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所 产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。 2. 严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断

 小鼠（Mouse）抗双链 DNA 抗体/天然 DNA 抗体（dsDNA） ELISA 检测试剂盒 检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往 预先包被免疫球蛋白M（IgM）抗体的包被微孔中，依次加入标本、 标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显 色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成 ＊终的黄色。颜色的深浅和样品中的免疫球蛋白M（IgM）呈正相关。 用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。样品收集、处理及保存方法1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细 胞刺激，收集血液后，3000 转离心 10 分钟将血清和红细胞迅速小心 地分离。 2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心 30 分钟取上清。3. 细胞上清液：3000 转离心 10 分钟去除颗粒和聚合物。 4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心 10 分钟 取上清。5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存 于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。自备物品 1. 酶标仪（450nm） 2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 3. 37℃恒温箱 操作注意事项 1. 试剂盒保存在 2-8℃，使用前室温平衡 20 分钟。从冰箱取出的 浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解 后再使用。2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保 存。3. 浓度为 0 的 S0 号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明 书操作时样本已经稀释 5 倍，＊终结果乘以 5 才是样本实际浓度。4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。5. 所有液体组分使用前充分摇匀。 试剂盒组成 名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板 12 孔×8 条12 孔×4 条无标准品0.3ml*6管0.3ml*6管无样本稀释液6ml3ml无检测抗体-HRP10ml5ml无20×洗涤缓冲液25mL15ml按说明书进行稀释底物A6ml3ml无底物B6ml 3ml无终止液6ml3ml无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、1.25、2.5、5、10、20 g/L 试剂的准备 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按 1：20 稀释，即 1 份的 20×洗涤 缓冲液加 19 份的蒸馏水。 洗板方法 1. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置 1min 后甩尽 孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板 5 次。 2. 自动洗板机：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。 操作步骤 1. 从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自 封袋密封放回 4℃。 2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品 50μ L； 3. 样本孔先加待测样本 10μL，再加样本稀释液 40μL；空白孔不 加。 4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶 （HRP）标记的检测抗体 100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅 或恒温箱温育 60min。 5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置 1min，甩去 洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板 5 次（也可用洗板机洗板）。 6. 每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。 7. 每孔加入终止液 50μL，15min 内，在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。 结果判断 绘制标准曲线：在 Excel 工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应 OD 值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样 本浓度值。 试剂盒性能 1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数 R 值，大于等于 0.9900。 2. 灵敏度：＊低检测浓度小于 0.1 g/L。 3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。 4. 重复性：板内、板间变异系数均小于 15%。5. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。6. 有效期：6 个月 免责声明 1. 试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所 产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。 2. 严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断

小鼠（Mouse）免疫球蛋白 M（IgM） ELISA 检测试剂盒 检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往 预先包被免疫球蛋白M（IgM）抗体的包被微孔中，依次加入标本、 标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显 色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成 ＊终的黄色。颜色的深浅和样品中的免疫球蛋白M（IgM）呈正相关。 用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。样品收集、处理及保存方法1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细 胞刺激，收集血液后，3000 转离心 10 分钟将血清和红细胞迅速小心 地分离。 2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心 30 分钟取上清。3. 细胞上清液：3000 转离心 10 分钟去除颗粒和聚合物。 4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心 10 分钟 取上清。5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存 于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。自备物品 1. 酶标仪（450nm） 2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 3. 37℃恒温箱 操作注意事项 1. 试剂盒保存在 2-8℃，使用前室温平衡 20 分钟。从冰箱取出的 浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解 后再使用。2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保 存。3. 浓度为 0 的 S0 号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明 书操作时样本已经稀释 5 倍，＊终结果乘以 5 才是样本实际浓度。4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。5. 所有液体组分使用前充分摇匀。 试剂盒组成 名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板 12 孔×8 条12 孔×4 条无标准品0.3ml*6管0.3ml*6管无样本稀释液6ml3ml无检测抗体-HRP10ml5ml无20×洗涤缓冲液25mL15ml按说明书进行稀释底物A6ml3ml无底物B6ml 3ml无终止液6ml3ml无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、1.25、2.5、5、10、20 g/L 试剂的准备 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按 1：20 稀释，即 1 份的 20×洗涤 缓冲液加 19 份的蒸馏水。 洗板方法 1. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置 1min 后甩尽 孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板 5 次。 2. 自动洗板机：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。 操作步骤 1. 从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自 封袋密封放回 4℃。 2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品 50μ L； 3. 样本孔先加待测样本 10μL，再加样本稀释液 40μL；空白孔不 加。 4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶 （HRP）标记的检测抗体 100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅 或恒温箱温育 60min。 5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置 1min，甩去 洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板 5 次（也可用洗板机洗板）。 6. 每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。 7. 每孔加入终止液 50μL，15min 内，在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。 结果判断 绘制标准曲线：在 Excel 工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应 OD 值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样 本浓度值。 试剂盒性能 1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数 R 值，大于等于 0.9900。 2. 灵敏度：＊低检测浓度小于 0.1 g/L。 3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。 4. 重复性：板内、板间变异系数均小于 15%。5. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。6. 有效期：6 个月 免责声明 1. 试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所 产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。 2. 严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者 承担。本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断 

仅供研究使用 小鼠二磷酸腺苷（ADP）ELISA试剂盒实验原理：                                         试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被小鼠4-羟基壬烯醛(4-HNE)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成＊终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠4-羟基壬烯醛(4-HNE)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份密封袋1个1个封板膜12孔×4条2片（96）2-8℃保存微孔酶标板1×4812孔×8条2-8℃保存标准品0.3mL*6管0.3mL*6管2-8℃保存标准品稀释液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存注意：使用前请检查试剂盒中试剂的标签和数量与表格是否一致。试剂盒操作步骤：   实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。 为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液 100μl（取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制），37℃,60分钟。3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。4.每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液（同生物素标记抗体工作液） 100μl，37℃，60分钟。5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。6.依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后15分钟以内进行检测。小鼠二磷酸腺苷（ADP）ELISA 试剂盒 标本的采集及保存：血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过一晚后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。细胞培养物上清或其它生物标本：1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 (注：标本溶血会影响**检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。)标本的稀释原则：首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内，检测的结果才是准确的。稀释的过程中，应做好详细的记录。计算浓度时，稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“N”。标准品的稀释原则：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为300 pg/ml，做系列倍比稀释后，分别稀释300 pg/ml，150 pg/ml，75 pg/ml，37.5 pg/ml，18.5 pg/ml，9 pg/ml，4.5 pg/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0 pg/ml，临用前15分钟内配制。 如配制150 pg/ml标准品：取0.5ml（不要少于0.5ml）300 pg/ml的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。生物素标记抗体的稀释原则：临用前以生物素标记抗体稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100μl），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素标记抗体加990μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则：临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100μl），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根过氧化物酶标记亲和素加990μl辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制实验结果计算：    以标准物的浓度为横坐标（对数坐标），OD值为纵坐标（普通坐标），在半对数坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。注意事项：1.当混合蛋白溶液时应尽量轻缓，避免起泡。2.洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。3.一次加样时间**控制在5分钟内，如标本数量多，建议使用排枪加样。4.请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。5.如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请乘以稀释倍数。6.在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。7.底物请避光保存。8.不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。试剂盒性能1．准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。2．灵敏度：＊低检测浓度小于10 pg/ml。3．特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。4．重复性：批内与批见应分别小于9%和15%。

仅供研究使用 小鼠4-羟基壬烯醛(4-HNE)ELISA试剂盒实验原理：                                         试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被小鼠4-羟基壬烯醛(4-HNE)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成＊终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠4-羟基壬烯醛(4-HNE)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份密封袋1个1个封板膜12孔×4条2片（96）2-8℃保存微孔酶标板1×4812孔×8条2-8℃保存标准品0.3mL*6管0.3mL*6管2-8℃保存标准品稀释液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存注意：使用前请检查试剂盒中试剂的标签和数量与表格是否一致。试剂盒操作步骤：   实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。 为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液 100μl（取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制），37℃,60分钟。3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。4.每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液（同生物素标记抗体工作液） 100μl，37℃，60分钟。5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。6.依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后15分钟以内进行检测。小鼠4-羟基壬烯醛(4-HNE)ELISA 试剂盒 标本的采集及保存：血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过一晚后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。细胞培养物上清或其它生物标本：1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 (注：标本溶血会影响**检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。)标本的稀释原则：首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内，检测的结果才是准确的。稀释的过程中，应做好详细的记录。计算浓度时，稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“N”。标准品的稀释原则：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为300 pg/ml，做系列倍比稀释后，分别稀释300 pg/ml，150 pg/ml，75 pg/ml，37.5 pg/ml，18.5 pg/ml，9 pg/ml，4.5 pg/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0 pg/ml，临用前15分钟内配制。 如配制150 pg/ml标准品：取0.5ml（不要少于0.5ml）300 pg/ml的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。生物素标记抗体的稀释原则：临用前以生物素标记抗体稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100μl），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素标记抗体加990μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则：临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100μl），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根过氧化物酶标记亲和素加990μl辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制实验结果计算：    以标准物的浓度为横坐标（对数坐标），OD值为纵坐标（普通坐标），在半对数坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。注意事项：1.当混合蛋白溶液时应尽量轻缓，避免起泡。2.洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。3.一次加样时间**控制在5分钟内，如标本数量多，建议使用排枪加样。4.请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。5.如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请乘以稀释倍数。6.在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。7.底物请避光保存。8.不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。试剂盒性能1．准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。2．灵敏度：＊低检测浓度小于10 pg/ml。3．特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。4．重复性：批内与批见应分别小于9%和15%。

                                 小鼠活性氧(ROS)ELISA试剂盒实验原理    ELISA运用了免疫学原理和化学反应显色原理，需要将抗原或抗体预包被在固相载体表面，使后来形成的抗原-抗体-酶 (荧光基团) -底物复合物黏附在载体上，通过检测OD值或发光值，来检测靶蛋白的含量。   实验所需自备物品1. 酶标仪（450nm）2. 加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3. 37℃恒温箱   试剂盒组成名称96 孔配置48 孔配置备注微孔酶标板12 孔×8 条12 孔×4 条无标准品0.5mL0.5mL按说明书进行稀释标准品xishi液6mL3mL按说明书进行稀释样本xishi液6mL3mL按说明书进行稀释检测抗体-HRP6mL3mL无20×洗涤缓冲液20mL20mL按说明书进行稀释底物 A6mL3mL无底物 B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2 张2 张无说明书1 份1 份无自封袋1 个1 个无 操作步骤 1. 准备工作：将试剂盒从冰箱中取出，室温放置30分钟，使试剂盒恢复至室温。同时准备好实验所需的材料和器具。2. 加样：在酶标板的弟1个孔中加入标准品50μL，然后在后续的孔中依次加入待测样本50μL。3. 温育：将酶标板密封，在37℃下温育30分钟。4. 洗涤：用洗涤液清洗酶标板，共洗涤5次。每次洗涤后，用吸水纸轻轻吸干孔内液体。5. 加酶：在每个孔中加入酶标物100μL。6. 温育：再次将酶标板密封，在37℃下温育30分钟。7. 洗涤：用洗涤液清洗酶标板，共洗涤5次。每次洗涤后，用吸水纸轻轻吸干孔内液体。8. 加底物：在每个孔中加入底物A液50μL，再加入底物B液50μL。9. 终止反应：在每个孔中加入终止液50μL。10. 检测：用酶标仪在450nm波长下读取各孔的吸光度（OD值）。小鼠活性氧(ROS)ELISA试剂盒结果分析根据标准品和样本的OD值，绘制标准曲线，从而计算出样本中角蛋白1（KRT1）的浓度。具体分析方法可参考试剂盒说明书或相关文献。 注意事项1. 在操作过程中，应保持酶标板的干燥，避免水分进入孔内。2. 加样时需确保加样准确、无气泡产生。3. 温育和洗涤过程中需严格控制时间和温度，确保实验结果的准确性。4. 在使用酶标仪读取OD值时，需确保波长设置正确，避免误差产生。5. 在整个实验过程中，需保持操作环境的清洁和整洁，避免交叉污染。洗板方法1.手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置 1min 后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板 5次。2.自动洗板机：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。

实验原理   试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被小鼠谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成＊终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。保存条件及有效期1.本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中小鼠谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)的含量；2.试剂盒保存：2-8℃；3.有效期：6个月。小鼠谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)ELISA试剂盒标本的采集及保存1.血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过一晚后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 2.血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 3.细胞培养物上清或其它生物标本：1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 (注：标本溶血会影响**检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。)    标本的稀释原则：首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内，检测的结果才是准确的。稀释的过程中，应做好详细的记录。计算浓度时，稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“N”。    标准品的稀释原则：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为300 pg/ml，做系列倍比稀释后，分别稀释300 pg/ml，150 pg/ml，75 pg/ml，37.5 pg/ml，18.5 pg/ml，9 pg/ml，4.5 pg/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0 pg/ml，临用前15分钟内配制。 如配制150 pg/ml标准品：取0.5ml（不要少于0.5ml）300 pg/ml的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。    生物素标记抗体的稀释原则：临用前以生物素标记抗体稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100μl），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素标记抗体加990μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。    辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则：临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100μl），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根过氧化物酶标记亲和素加990μl辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。 操作步骤   实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。 1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。 为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。 2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液 100μl（取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制），37℃,60分钟。 3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。4.每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液（同生物素标记抗体工作液） 100μl，37℃，60分钟。5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。6.依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。 在加终止液后15分钟以内进行检测。注意事项1.用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。2.每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是**加底物溶液及2N H2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。 3.为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜。 4.未使用完的酶标板或者试剂，请于2-8℃保存。标准品、生物素标记抗体工作液、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素标记抗体工作液或、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液。 5.建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。 洗板方法手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。 自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。 计算   以标准物的浓度为横坐标（对数坐标），OD值为纵坐标（普通坐标），在半对数坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 注意事项1.当混合蛋白溶液时应尽量轻缓，避免起泡。2.洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。3.一次加样时间**控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4.请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。5.如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请乘以稀释倍数。6.在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。7.底物请避光保存。 8.不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。 注意事项：收集标本前必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天进行检测的标本，储存在4 ℃备用，如有特殊原因需要周期收集标本， 将标本及时分装后放在-20 ℃或-70 ℃条件下保存。避免反复冻融。标本2 -8 ℃可保存48 小时，-20 ℃可保存1 个月。-70度可保存6 个月。部分激素类标本需添加抑肽酶。计算：以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 小鼠谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)ELISA试剂盒试剂盒性能1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.92以上。2.批内与批见应分别小于9%和15%

                                 小鼠还原型谷胱甘肽(GSH)ELISA检测试剂盒实验原理    ELISA运用了免疫学原理和化学反应显色原理，需要将抗原或抗体预包被在固相载体表面，使后来形成的抗原-抗体-酶 (荧光基团) -底物复合物黏附在载体上，通过检测OD值或发光值，来检测靶蛋白的含量。   实验所需自备物品1. 酶标仪（450nm）2. 加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3. 37℃恒温箱   试剂盒组成名称96 孔配置48 孔配置备注微孔酶标板12 孔×8 条12 孔×4 条无标准品0.5mL0.5mL按说明书进行稀释标准品xishi液6mL3mL按说明书进行稀释样本xishi液6mL3mL按说明书进行稀释检测抗体-HRP6mL3mL无20×洗涤缓冲液20mL20mL按说明书进行稀释底物 A6mL3mL无底物 B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2 张2 张无说明书1 份1 份无自封袋1 个1 个无 操作步骤 1. 准备工作：将试剂盒从冰箱中取出，室温放置30分钟，使试剂盒恢复至室温。同时准备好实验所需的材料和器具。2. 加样：在酶标板的弟1个孔中加入标准品50μL，然后在后续的孔中依次加入待测样本50μL。3. 温育：将酶标板密封，在37℃下温育30分钟。4. 洗涤：用洗涤液清洗酶标板，共洗涤5次。每次洗涤后，用吸水纸轻轻吸干孔内液体。5. 加酶：在每个孔中加入酶标物100μL。6. 温育：再次将酶标板密封，在37℃下温育30分钟。7. 洗涤：用洗涤液清洗酶标板，共洗涤5次。每次洗涤后，用吸水纸轻轻吸干孔内液体。8. 加底物：在每个孔中加入底物A液50μL，再加入底物B液50μL。9. 终止反应：在每个孔中加入终止液50μL。10. 检测：用酶标仪在450nm波长下读取各孔的吸光度（OD值）。小鼠还原型谷胱甘肽(GSH)ELISA检测试剂盒结果分析根据标准品和样本的OD值，绘制标准曲线，从而计算出样本中角蛋白1（KRT1）的浓度。具体分析方法可参考试剂盒说明书或相关文献。 注意事项1. 在操作过程中，应保持酶标板的干燥，避免水分进入孔内。2. 加样时需确保加样准确、无气泡产生。3. 温育和洗涤过程中需严格控制时间和温度，确保实验结果的准确性。4. 在使用酶标仪读取OD值时，需确保波长设置正确，避免误差产生。5. 在整个实验过程中，需保持操作环境的清洁和整洁，避免交叉污染。洗板方法1.手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置 1min 后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板 5次。2.自动洗板机：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。

                                 小鼠还原型谷胱甘肽(GSH)ELISA检测试剂盒实验原理    ELISA运用了免疫学原理和化学反应显色原理，需要将抗原或抗体预包被在固相载体表面，使后来形成的抗原-抗体-酶 (荧光基团) -底物复合物黏附在载体上，通过检测OD值或发光值，来检测靶蛋白的含量。   实验所需自备物品1. 酶标仪（450nm）2. 加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3. 37℃恒温箱   试剂盒组成名称96 孔配置48 孔配置备注微孔酶标板12 孔×8 条12 孔×4 条无标准品0.5mL0.5mL按说明书进行稀释标准品xishi液6mL3mL按说明书进行稀释样本xishi液6mL3mL按说明书进行稀释检测抗体-HRP6mL3mL无20×洗涤缓冲液20mL20mL按说明书进行稀释底物 A6mL3mL无底物 B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2 张2 张无说明书1 份1 份无自封袋1 个1 个无 操作步骤 1. 准备工作：将试剂盒从冰箱中取出，室温放置30分钟，使试剂盒恢复至室温。同时准备好实验所需的材料和器具。2. 加样：在酶标板的弟1个孔中加入标准品50μL，然后在后续的孔中依次加入待测样本50μL。3. 温育：将酶标板密封，在37℃下温育30分钟。4. 洗涤：用洗涤液清洗酶标板，共洗涤5次。每次洗涤后，用吸水纸轻轻吸干孔内液体。5. 加酶：在每个孔中加入酶标物100μL。6. 温育：再次将酶标板密封，在37℃下温育30分钟。7. 洗涤：用洗涤液清洗酶标板，共洗涤5次。每次洗涤后，用吸水纸轻轻吸干孔内液体。8. 加底物：在每个孔中加入底物A液50μL，再加入底物B液50μL。9. 终止反应：在每个孔中加入终止液50μL。10. 检测：用酶标仪在450nm波长下读取各孔的吸光度（OD值）。小鼠还原型谷胱甘肽(GSH)ELISA检测试剂盒结果分析根据标准品和样本的OD值，绘制标准曲线，从而计算出样本中角蛋白1（KRT1）的浓度。具体分析方法可参考试剂盒说明书或相关文献。 注意事项1. 在操作过程中，应保持酶标板的干燥，避免水分进入孔内。2. 加样时需确保加样准确、无气泡产生。3. 温育和洗涤过程中需严格控制时间和温度，确保实验结果的准确性。4. 在使用酶标仪读取OD值时，需确保波长设置正确，避免误差产生。5. 在整个实验过程中，需保持操作环境的清洁和整洁，避免交叉污染。洗板方法1.手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置 1min 后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板 5次。2.自动洗板机：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。