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ELISA试剂盒检测的注意事项

2018-06-29

  以下是影响ELISA检测的关键要素,也是很多ELISA 用户在试验中常常遇到的问题及处理方案 :

  Q1:为什么一切试剂和检测样本要平衡至室温后再进行加样操作?

  A1:温度是ELISA结合反响的重要影响要素。为了使一切样本在一致的温度下反响,试验前务 必将一切试剂平衡至室温,包括检测样本。避免因温度的动力学反响差异而导致ELISA检测结 果的不精确。

  Q2:为什么规范曲线线性较差?

  A2:依照引荐方法保存规范品;溶解规范品之前需时刻短离心,彻底搜集粉末;确保规范品彻底 溶解和混匀(大约10min),然后再进行后续的系列稀释进程,确保每一步都充沛混匀且精确 移液;显色的恰当停止;挑选适宜的数学拟合方程制作规范曲线。

  Q3:ELISA试验为什么有必要设置复孔?

  A3:为取得更精确的试验成果,强烈建议规范品及样本进行复孔检测。 由于复孔检测能够:

  ★核算平均值,确保试验成果更精确;

  ★处理试验中误操作形成的跳孔现象;

  ★核算CV值,对试验的操作和试剂盒的精密度进行评价。

  Q4:为什么试验进程中孵育、洗刷需求振动?怎么振动?

  A4:振动孵育使反响更充沛,振动洗刷使布景更洁净。建议运用酶标专用96孔微孔板振动器。 孵育进程振动,能够加速、加强抗原抗体间的彼此磕碰触摸,使得反响进程愈加彻底,OD值通 常会比未振动孵育的成果要高;洗刷进程振动,能够使洗板更洁净,在很大程度上能下降布景 值,同时能够进步试剂盒检测的灵敏度。

  Q5:何时停止ELISA反响?

  A5:ELISA试验zui终需求酶催化底物显色反响来完结,在zui适宜的时刻停止反响是ELISA试验成 功的重要要素。在HRP-TMB酶反响体系中,当zui高浓度规范品色彩不再变深,倒数2-3个浓度标 准品色彩开端有浅蓝色时,便需求停止反响;或许也能够根据zui高浓度规范品孔在620nm的OD 值来决议,OD620=0.9-0.95之间时即可停止。

  Q6:为什么酶标仪读数时有必要选用双波长?

  A6:首要,酶标仪运用前必须预热10-15min,使测读成果更安稳。其次,ELISA试验采用双波 长测定吸光度,能够扫除单波长检测时的测定搅扰(标本的浓度,搅扰色等)。一般采用zui大 波长作为参照波长,在参照波长下,检测物的吸光值zui小,检测波长和参照波长的吸光值之差 能够消除非特异性吸收;因而,双波长测定,可zui大极限的消除指纹、杂质及不透光的物质对 酶标仪读数带来的差错,以确保试验数据的精确度。


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